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[科普中国]-混合淋巴细胞培养试验

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混合淋巴细胞培养试验(mixedlymphocyteculture,MLC)是一种测定受体和供体主要组织相容性抗原(HLA抗原)相容程度的试验方法,常用于器官移植前的组织配型。混合淋巴细胞培养将供者与受者的淋巴细胞做双向混合培养,或者灭活供者的淋巴细胞做向混合培养,细胞反应的程度与供-受者相容的程度呈负相关的试验。正常值

形态计数法: 转化率0.05。

临床意义异常结果: 肾移植时,活体供肾者的转化率应10%。只能在同一批实验中选用低反应配组。淋巴细胞转化率10%者为不同两个体间的组织是相容的。 淋巴细胞混合培养试验用以检测患者的免疫状态。T淋巴细胞数减少时,转化率也降低。 可作为器官和骨髓移植的配型方法之一,用来选择合适的供体。如转化率高为供受者分歧用。转化率低,移植后的成功率高。 需要检测人群: 免疫力受损或者缺失的人群

注意事项检查时:本试验可作为器官移植筛选供体的方法,转化率低者移植成功率高,转化率高者成功率低。 不适宜人群:排斥反应大的人

检查过程(1)供体淋巴细胞的制备 新鲜外周静脉血按1∶1比例加在装有比重为1.077的淋巴细胞分离液的离心管中,轻稳加在液面上 2000 r/min离心20 min,吸取中间雾状淋巴细胞层,生理盐水洗涤2次,台盼蓝染色,计数板计数。调整细胞密度为2×10^9/L,分成3管,各自离心,留取沉淀。 每管中加入250 μL丝裂霉素(终浓度50 mg/L)和1.75 mL生理盐水,37℃水浴40 min, 生理盐水离心洗涤2次。用含100 mL/L胎牛血清的RPMI 1640液调整细胞密度为1×1010/L。加入抗体封闭抗原,标记为D。 (2)受体淋巴细胞的制备 新鲜外周静脉血按1∶1比例加在装有比重为1.077的淋巴细胞分离液的离心管中,轻稳加在液面上, 2000 r/min离心20 min,吸取中间雾状淋巴细胞层, 生理盐水洗涤2次, 用含120 mL/L胎牛血清的RPMI 1640培养液调整细胞密度为1×1010/L, 标记为R。 (3)混合淋巴细胞培养 将已制备好的R和D按如下分组加入96孔板,置37℃,50 mL/L CO2孵箱中培养24 h。 A组:R 50 μL+D 50 μL;B组:R 50 μL+D 50 μL+IL?2纯化中和mAb 15 μL;C组:R 50 μL+IL?2纯化中和mAb 15 μL;D组:R 50 μL。 每组3个复孔,空白对照组为RPMI 1640培养液100 μL。

相关疾病获得性免疫缺陷综合征的神经系统表现,免疫缺陷性肺炎,Ⅱ型免疫母细胞性淋巴腺病,Ⅰ型免疫母细胞性淋巴腺病,小儿血管免疫母细胞淋巴结病,小儿高免疫球蛋白E综合征,小儿选择性免疫球蛋白A缺乏症,小儿选择性免疫球蛋白G亚类缺陷病,小儿原发性免疫缺陷病,小儿继发性免疫缺陷病

相关症状免疫损害,免疫性肾炎,血清免疫球蛋白可升高,正常免疫球蛋白减少,免疫功能障碍,免疫缺陷,免疫力下降,免疫性溶血,免疫力降低

1本词条内容贡献者为:

李擎天 - 副教授 - 上海交通大学医学院附属瑞金医院 检验科